Skip to content

Toll-like Receptor 3 i Geographic Atrophy w związanym z wiekiem zwyrodnieniu plamki ad

1 miesiąc ago

475 words

Następnie testowaliśmy funkcjonalny efekt implikowanego wariantu TLR3 w ludzkich komórkach nabłonka barwnikowego siatkówki oraz w nabłonku barwnikowym siatkówki u myszy typu dzikiego i myszy z nokautem Tlr3 (Tlr3 – / -). Metody
Pacjenci
Badanie zostało zaaprobowane przez komisje egzaminacyjne Uniwersytetu Utah, Johns Hopkins University i Oregon Health & Science University; instytucjonalna komisja rewizyjna Akademii Medycznej Sichuan i Szpitala Ludowego Prowincji Sichuan; oraz Komitet ds. dostępu do chorób związanych ze starzeniem się oka (AREDS). Wszystkie osoby przed podjęciem decyzji wyraziły pisemną świadomą zgodę. Szczegółowe informacje na temat rekrutacji pacjentów i informacje na temat serii kontroli przypadku znajdują się w części Materiały i metody w Dodatku uzupełniającym (dostępne wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie www.nejm.org).
Genotypowanie
Genotypowaliśmy polimorfizmy pojedynczego nukleotydu (SNP) w TLR3 i TLR4 przy użyciu systemu SNaPshot Multiplex i analizatora genetycznego 3100XL (ABI), zgodnie z instrukcjami producenta. Sekwencje starterów stosowanych dla każdego SNP podano w tabeli S2 w dodatkowym dodatku; lista warunków amplifikacji jest dostępna na żądanie. Oprogramowanie Haploview było również używane do testowania stowarzyszeń allelicznych.
Test żywotności in vitro dla komórek nabłonka barwnikowego ludzkiej siatkówki
Pierwotne ludzkie komórki nabłonka barwnikowego siatkówki wyizolowano z oczu uzyskanych z Advanced Bioscience Resources i przepuszczono przez filtry nylonowe 70 .m i 40 .m (Falcon Plastics). Po odwirowaniu przy 1500 obrotach na minutę przez 5 minut, fragmenty pozostające w filtrze delikatnie zdysocjowano i wysiano na powlekane lamininą 6-studzienkowe płytki i hodowano w pożywce Eagle a zmodyfikowanej przez Dulbecco (VWR International) z surowicą płodową (25% dla hodowli pierwotnej i 10% dla kolejnych hodowli) (Omega Scientific), 100 U penicyliny na mililitr, 100 .g streptomycyny na mililitr i 2 mM l-glutaminy (Omega Scientific) w 37 ° C przy 95% powietrza i 5% dwutlenku węgla. W momencie konfluencji komórki oddzielono przy użyciu 0,05% trypsyny i 0,02% EDTA (VWR International), zebrano przez odwirowanie i zawieszono. Czystość hodowli komórek nabłonka barwnikowego siatkówki przekraczała 95%, co potwierdzono dodatnią immunohistologią dla cytokeratyny i nieobecności makrofagów dodatnich pod względem CD11b i komórek śródbłonka z czynnikiem von Willebranda.
Komórki nabłonka barwnikowego siatkówki o homozygotycznym genotypie (412 Leu-Leu) lub heterozygotycznym genotypie (412Leu-Phe) z pasa 3 lub 4 zsynchronizowano dla cyklu komórkowego przez hodowlę w zmodyfikowanym podłożu Eagle a o wysokim stężeniu glukozy Dulbecco (GIBCO) uzupełnionym 10% płodowym surowicy (GIBCO), aby osiągnąć konfluencję, a następnie przez głód w surowicy przez noc. Hodowano je na 96-studzienkowych płytkach przy gęstości 10 000 komórek na studzienkę (60 do 70% konfluencji), a następnie przez 24 godziny stymulowano interferonem-. / . (1000 U na mililitr, Pestka Biomedical Laboratories Interferon Source). Hodowle potraktowano następnie kwasem poliinozyno-policytylowym (InvivoGen) lub kwasem polideoksyinozyno-polidydoksycytylowym (Sigma-Aldrich). Po 48 godzinach mierzono żywotność komórek za pomocą testu immunoenzymatycznego związanego z bromodeoksyurydyną (Chemicon) zgodnie z instrukcjami producenta
[przypisy: przychodnia cepelek koszykowa, mcz lubin Wrocław, mcz lubin ]

0 thoughts on “Toll-like Receptor 3 i Geographic Atrophy w związanym z wiekiem zwyrodnieniu plamki ad”

Powiązane tematy z artykułem: antrum żołądka mcz lubin przychodnia cepelek koszykowa